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      精品推薦 | 流式常用同型對照-北京博奧森生物技術有限公司
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      精品推薦 | 流式常用同型對照
      發表者:北京博奧森生物      發表時間:2022-1-10


      同型對照是什么?

      同型對照 (Isotype control) 是一種與一抗保持相似特性但缺乏特異性靶標的抗體。在流式實驗中,同型對照作為陰性對照,可以區分特定抗體信號與非特異性背景染色,能夠排除干擾因素以確保實驗結果的準確性。同型對照還可以用于設定流式細胞儀的電壓,并有效節約實驗成本。


      產生背景染色的原因?

      1.抗體與靶細胞的 Fc 受體、內源性酶、死細胞等因素的非特異性結合產生的背景染色。

      2.細胞本身的熒光產生的背景染色。

      3.流式儀器產生的背景染色。

      圖1. HepG2 和 A549 細胞通過使用抗體 Caspase-3 (bs-0081R-FITC) 進行流式細胞檢測,藍色為空白對照,黃色為同型對照,綠色為特異性一抗。流式實驗中根據同型對照設置陰性閾值。



      什么情況下應使用同型對照?

      同型對照也不是適用于所有情況。同型對照僅能檢測不由表位引起的非特異性結合,而相似表位不同抗原,或不同表位相同抗原產生的交叉反應就不能被同型對照檢測。在以下情況中,實驗人員應使用同型對照以確保流式實驗的準確性:

      1.實驗人員流式實驗經驗較少時應使用同型對照;2.進行胞內流式實驗,包括胞內因子,趨化因子,蛋白信號等應使用同型對照;3.使用不常見或特異性不高的抗體時應使用同型對照。


      如何選擇同型對照?

      在實驗中選擇的同型對照需要與一抗的特性相匹配。合適的同種型對照應與一抗的宿主種族、Ig亞型、偶聯物、輕鏈和工作濃度相同。在流式實驗中,選擇合適的同型對照可以有效排除干擾因素,實現更精確的數據分析。而選用 PBS 作為空白對照則達不到同樣的效果,甚至可能誤導試驗結果。


      流式檢測中的常用同型對照

      抗體名稱

      標記熒光素

      貨號

      Mouse IgG1

      FITC

      C03-11001

      PE

      C03-11002

      PerCP

      C03-11003

      Mouse IgG2a

      FITC

      C03-12001

      PE

      C03-12002

      PerCP

      C03-12003

      Mouse IgG2b

      FITC

      C03-13001

      PE

      C03-13002

      PerCP

      C03-13003

      Mouse IgG

      FITC

      bs-0296P-FITC

      PE

      bs-0296P-PE

      APC

      bs-0296P-APC

      AF488

      bs-0296P-A488

      AF594

      bs-0296P-AF594

      AF647

      bs-0296P-A647

      CY3

      bs-0296P-CY3

      CY5

      bs-0296P-CY5

      Rat IgG

      FITC

      bs-0293P-FITC

      PE

      bs-0293P-PE

      APC

      bs-0293P-APC

      AF488

      bs-0293P-AF488

      AF594

      bs-0293P-AF594

      AF647

      bs-0293P-AF647

      CY3

      bs-0293P-CY3

      CY5

      bs-0293P-CY5

      Rat IgG

      FITC

      bs-0295P-FITC

      PE

      bs-0295P-PE

      APC

      bs-0295P-APC

      AF488

      bs-0295P-AF488

      AF594

      bs-0295P-AF594

      AF647

      bs-0295P-AF647

      CY3

      bs-0295P-CY3

      CY5

      bs-0295P-CY5


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